空间蛋白组Q&A

1. 什么是多重荧光免疫组化（mIHC）/CODEX？二者有什么区别？

mIHC和CODEX均是在单张切片上同时标记多种蛋白标志物的一种染色技术，目的是为了观察不同标志物在组织原位的表达分布、共定位及空间相互关系（定性、定量、定位）。

最主要的区别在于标记marker数量不同，mIHC在单张切片上可标记3-9个指标，实现10色以内的染色，而CODEX则可以实现10指标以上的染色，蛋白标志物高达100+。

2.mIHC和CODEX技术的应用领域有哪些？

只要是用到组织切片，客户关注不同类型细胞的地方都可以用。涵盖多种研究领域，包括肿瘤微环境/免疫研究、神经科学领域、 感染性疾病研究、自身免疫研究、干细胞研究、器官移植等。

3. mIHC技术有哪些优势？

不限一抗种属，灵活选择抗体；信号放大10-1000倍；操作无需避光，荧光信号稳定；分析灵活；

4. mIHC技术适用的样本类型有哪些？冰冻样本可以做吗？

石蜡包埋的组织样本，TMA组织芯片。不推荐使用冰冻切片做mIHC染色，因为在多轮修复过程中容易造成脱片。

5.如何选择适用mIHC的抗体？

首选单克隆抗体，特异性会更好一些，其次，适用于mIHC或IHC-P。

6. 低表达的靶标蛋白用mIHC技术能检测出来吗？

mIHC技术也被称为酪胺信号放大TSA（Tyramide signal amplification）技术，具有信号放大功能，因此低表达靶标蛋白也可以被检测到。

7. 多靶标的染色会导致荧光串色吗？

基本不会，我们采用了先进的全光谱扫描成像设备，具有光谱拆分、扣除自发荧光、降低染色背景的优势。

8.非特异性染色是怎么产生的？如何改善？

非特异的产生有几种可能，1.抗体是多克隆的，容易产生非特异，可以换用单克隆抗体或者降低浓度以及修复强度来改善；2.信号放大过强，可以降低染液反应时间或者浓度；3.一抗浓度过高或者修复过度，采用比较低的稀释抗体比例，或降低修复强度（温度或者时间或者修复液PH）。

9. CODEX技术有哪些优势？

快速，10分钟成像100万细胞；高参数，单个样本可同时进行100+蛋白标志物检测；单细胞分辨率，高达0.25μm/像素；

10. CODEX染色对抗体有什么要求吗？

要求目标蛋白的抗体上偶连一段特定 barcode 序列的 DNA 标签链。可以选择商业化的已偶联抗体，若没有，可以选择定制，详情咨询我司技术支持。

11.CODEX技术适用的样本类型有哪些？

兼容人和小鼠的石蜡样本、冰冻样本、TMA芯片以及培养的细胞、类器官等。

12. 单细胞测序的数据如何与空间单细胞蛋白组（CODEX）技术相关联并提升文章的档次？

scRNA-seq要求细胞完整的从组织中回收并存活，很多研究不能进行多种细胞类型的研究，同时在很大程度上破坏了细胞的空间背景，不能为细胞的身份和功能分析提供信息。CODEX空间单细胞蛋白组分析可使得组织内各种细胞的分布情况可视化，弥补了单细胞测序在原位信息呈现上的不足，如流式或CyTOF只是对表型比例的验证，无法获得细胞空间位置上的验证，而CODEX技术则能更精确、全面的展示组织上细胞间的空间关系。

13. CODEX对不同组织样本的要求是怎样的？包括样本的大小尺寸？

使用防脱片处理的载玻片，组织切片应完全粘在载玻片上，没有褶皱或撕裂。为确保组织切片不被损坏，关键是不要将组织切片堆叠在一起。对于样本的尺寸，厚度可尽量在4~10μm，成像面积大小为18*35mm。

14. 如何送样？送样形式及运输要求？

邮寄/闪送（不受区域限制）或者销售自取都可以。全国样本都能接收。送样形式包括：1.新鲜组织样本取材后直接放入固定液中，常温运输；2.待实验的整个蜡块，4℃或常温运输；3.切好的石蜡组织切片或 TMA 芯片，4℃或常温运输；4.切好的冰冻组织切片，干冰运输。

15.提供单独的数据分析服务吗？

提供的，我们会根据客户提供的染色图像及分析需求进行数据分析。